病毒包装质粒的保存,慢病毒包装三质粒系统比例

保密知识问答|对涉密载体的保存有哪些具体要求？1.涉密载体的保存通常受到严格的要求和控制，以确保重要信息的安全2.涉密载体应存放在经过物理安全认证的保密设施中，如专门的保密室、保密柜3.对保存的涉密载体定期进行检查核对，防止泄密事件发生4.涉密载体应根据其密级别进行标记和分类。这样可以正确辨识和处理涉密信息，避免信息泄露或错误处理5.当涉密载体不再需要时，要遵循相关规定进行销毁，防止涉密信息被恶意获取。

1、什么是慢病毒包装

慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV1为基础发展起来的基因治疗载体，可以将外源基因或外源干扰序列有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。一经感染宿主细胞，慢病毒即利用反转录酶将其RNA转录成双链DNA，随后永久的整合到宿主细胞的染色体中，实现长时间稳定表达。

慢病毒载体（Lentiviralvector,LVs）是在HIV1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（蛋白质编码序列、shRNA或gRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。

2、慢病毒包装的简要流程

慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。3）培养48hrs72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。4）病毒的纯化和浓缩。5）分装、80℃保存。6）滴度测定目的基因鉴定。

3、病毒包装-慢病毒

!在程序上，慢病毒和逆转录病毒载体的一个重要区别在于：对慢病毒载体，通常包装、包膜和转运质粒共转染入包装细胞系，而对逆转录病毒载体，只有转运载体才转染到细胞系内，而细胞系早已稳定表达另外两种载体.包膜蛋白病毒载体可以借助其他病原体的外壳蛋白包装成假病毒，以改变其嗜性。最常用的是疱疹性口腔炎病毒膜融合包膜G糖蛋白（VSVG）。

杆状病毒GP64和肝炎E1和E2型假病毒增强肝转导，纤丝病毒包膜型假病毒增强呼吸道上皮细胞或内皮细胞的转导。有趣的是，假病毒还会影响狂犬病毒糖蛋白包被的慢病毒的运输，导致轴突逆行运输[12]，注意：由于γ逆转录病毒和慢病毒gag、pol和env基因间的亚型差异，转运质粒和包装质粒不能够互换。